成果概要：
时间分辨荧光免疫分析法（time resolved fluoroimmunoassay, TRFIA）是基于荧光波长与其激发波长的巨大差异（从而克服了激发光等杂色光和背景荧光的影响）、以及Eu(铕）族稀土金属长效荧光标记物导致的时间延迟（从而能在关闭激发光后再测定荧光强度）——这两种特性发展起来的一种微量检测分析方法（其灵敏度高达10-19，较放射免疫分析高出3个数量级）。TRFIA具有以下特点：①灵敏度高，检测下限为1pmol，达到或超过放射免疫分析水平；②线性范围宽，可达4-6个数量级，远远宽于ELISA的线性范围，也超过化学发光分析的线性范围。线性范围宽有利于精确定量测定；③不受样品中自然荧光干扰，背景低；④操作简便、易自动化，标记物制备简便且稳定，无放射性污染。因此，TRFIA 技术因集酶标记、同位素标记技术的优点于一身，同时又克服了它们的局限，具有本底低、灵敏度高、检测范围线性宽、试剂有效期长等特点，是一项适宜基层医院的免疫学检验技术。
目前结核病的的诊断存在敏感性低、假阳性、假阴性和操作时间（培养）过长等问题，建立简单、快速、准确的实验室检查尽早对结核病做出诊断对控制结核病疫情至关重要。培养滤液蛋白10(culture filtrate protein 10, CFP10) 是结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌特有的分泌蛋白（分子量为10KD），而卡介苗及非致病分枝杆菌则缺乏该蛋白。我们发现，检测CFP10可以快速诊断结核性胸水。
急性心肌梗塞的及时准确诊断，对挽救濒死心肌、改善预后、降低急性期病死率，均具有重要意义。心肌肌钙蛋白（Troponin）是心肌收缩的调节蛋白，由三个亚基组成：心肌肌钙蛋白C（cTnC）、心肌肌钙蛋白T（cTnT）和心肌肌钙蛋白I（TnI）。cTnI以两种形式存在于心肌，即：少量以游离形式存在于细胞胞浆，大部分以结合形式存在于肌原纤维上。cTnI具有对心肌损伤敏感性高，特异性强，发病后出现较早，并持续时间较长等特点，是目前急性心肌梗塞早期诊断、预后评价和不稳定性心绞痛早期诊断较好的心肌特异性标志物，现已成为心肌损伤的诊断“金标准”。
目前，国际上尚没有检测CFP10、cTnI的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。因此，我们拟以时间分辨荧光免疫分析法作为技术平台，成功研制出体外检测CFP10（发明专利申请号201010195242.2）、cTnI的诊断试剂盒（发明专利申请号201010228835.4），用于急性心肌梗塞（包括轻微心肌缺血性损伤、不稳定性心绞痛和心肌炎等疾病）的诊断。
我们采用双抗夹心分析法，即：针对CFP10或cTnI上不同抗原决定簇的两个单克隆抗体，一个包被固相载体，另一个用Eu3+标记，经过免疫反应形成免疫复合物后，用增强液将Eu3+从复合物上完全解离下来，与另一种螯合剂结合，检测荧光信号；荧光信号强弱与CFP10或cTnI含量成正比。
项目联系人：高基民 教授
联系方式：0577-86689748
地址：浙江温州茶山高教园区温州医学院检验医学与生命科学学院