成果概要：

    类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）作为危害人类健康最常见、最难治愈的免疫疾病之一，严重影响着患者的生活质量，是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要病因。我国现有该病患者2000万人，包括中重度活动性患者约400多万。类风湿性关节炎至今尚无特效疗法，传统的综合治疗方法针对炎症及后遗症采取措施缺乏显著疗效，并且长期使用易引起严重的副作用。临床表现为多处关节滑膜炎持久反复发作，可导致关节内软骨和骨的破坏，关节功能障碍，甚至残废。该病在世界范围内普遍存在，其发病率约占人群的1%-2%。因此，类风湿性关节炎已成为危害人类健康最常见、最难治的疾病之一。

TNFα拮抗剂作为治疗类风湿性关节炎的新型药物在缓解疼痛、改善和维持关节功能上有着明显的功效，得到了医学界的广泛重视，已成为目前治疗该病的研究热点。sTNFRII是TNFα的天然拮抗剂。研究表明，成熟的TNFα以三聚体（trimer）形式存在。因此，增强sTNFRII与TNFα间的亲和力可以通过sTNFRII的三聚体化来实现。

我们之前的研究提出了通过构建脂联素胶原状区域和球状结构域与sTNFRII融合基因的策略来获得三聚体化的sTNFRII，即 sTNFRII-gAD重组蛋白（专利号ZL200510100468.9）。该专利是利用了脂联素球部自动形成三聚体的特性而设计的，结果证明获得的三聚体化sTNFRII-gAD融合蛋白拮抗TNFα的活性将比二聚体化sTNFRII-Fc更高。然而，由于原核表达的蛋白容易形成包涵体，需要变复性，不能对蛋白质进行翻译后修饰，因此获得有活性的蛋白效率较低。因此本发明涉及用哺乳动物表达系统来制备目的蛋白。

本研究（专利号ZL201110073658.1）是中国发明专利（专利号ZL200510100468.9）的进一步延伸，改构了可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ-“脂联素”球部重组融合蛋白的基因序列，去除了肿瘤坏死因子受体Ⅱ和“脂联素”球部基因间的冗余序列（去除18个氨基酸），形成了只含有可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ和“脂联素”球部的新的基因；并合成了改造后的基因在哺乳动物细胞中表达的偏爱密码子。经过比较，改构后的基因表达的蛋白更加稳定，优化的密码子在哺乳动物细胞中表达效率提高约4-6倍。本发明还建立了一种快速大量获得蛋白的腺病毒/BHK21表达系统，该表达系统的生产规模易于放大，适应无血清培养，可以反复多次收获目标蛋白，成功制备了有生物学活性的改造后的融合蛋白。

项目联系人：高基民 教授

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