成果概要：

糖化血清白蛋白（GA）是血清白蛋白被葡萄糖糖化之后的产物，即血清白蛋白的赖氨酸残基上的ε-氨基基团被糖化。糖化白蛋白半衰期较短，测定糖化白蛋白的浓度可有效反映患者过去2~3周内平均血糖的水平，并不受临时血糖浓度波动的影响。目前，临床广泛采用测定糖化血清白蛋白（GA）与白蛋白（ALB）浓度的比值（C_GA/C_ALB）来反映较短期内糖尿病的控制程度。

自糖化血清白蛋白对糖尿病的诊断意义被临床所认识以来，已有阴离子交换层析法、高效液相色谱法、糖化氨基酸氧化酶分析法等诸多方法应用于血清GA的测定。前两种方法需要对GA进行复杂的样品前处理，同时需特殊、昂贵仪器，不适合临床常规分析。糖化氨基酸氧化酶分析法虽好，但只能单独检测GA浓度，而不能同时检测ALB浓度，从而无法直接报告C_GA/C_ALB比值。为了弥补此缺点，临床工作者常采用两个独立的体系分别检测GA和ALB浓度，即用糖化氨基酸氧化酶分析法测定GA浓度、用溴甲酚绿或溴甲酚紫比色法测定ALB浓度，再进一步求出C_GA/C_ALB比值，测量时影响因素多、变异系数大。

本发明的目的是为了解决上述技术的不足，建立了一种基于氨基酸氧化酶-过氧化物酶偶联、可单体系测定C_GA/C_ALB比值的新试剂盒。该试剂盒的检测原理为：第一步，在表面活性剂TritonX-100的存在下，蛋白酶将血清样本中的糖化白蛋白（GA）和白蛋白（ALB）迅速降解为果糖氨基酸、甘氨酸等氨基酸混合物；第二步，体系中的果糖氨基酸被果糖氨基氧化酶氧化产生过氧化氢，过氧化氢再在过氧化物酶的作用下与4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐反应生成紫红色化合物，检测540nm的吸光度值A₁，与标准对照后计算出糖化白蛋白浓度C_GA；第三步，体系中的氨基酸被氨基酸氧化酶反应产生过氧化氢，过氧化氢再在过氧化物酶的作用下与4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐反应生成紫红色化合物，引起540nm处的吸光度值上升，检测540nm的吸光度值A₂，与标准对照后计算出白蛋白浓度C_ALB；第四步，将第二步所测得的糖化白蛋白浓度C_GA除以第三步所测得白蛋白浓度C_ALB得血清C_GA/C_ALB比值。

该试剂盒采用单体系测定糖化白蛋白与白蛋白浓度比值，可以应用于目前广泛使用的临床生化自动分析仪，从而达到大规模测定样本的要求。

项目联系人：连国军  副教授

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