成果概要:
糖尿病是现代疾病中仅次于癌症的第二杀手。糖化血清白蛋白(GA)是血清白蛋白被葡萄糖糖化之后的产物,反映患者过去2~3周内平均血糖的水平,并不受临时血糖浓度波动的影响,可更灵敏、更确切地反映较短期内糖尿病的控制程度。
目前,临床广泛采用果糖氨基酸氧化酶(FAOD)法测定GA含量,该法在测定GA时,需要先用蛋白酶将糖化白蛋白酶解为糖化氨基酸,然后用特异性的果糖氨基酸氧化酶进行氧化,再偶联Trinder’s反应进行显色定量。已有的研究表明,用单纯的蛋白酶体系进行糖化白蛋白的酶解反应,需要数十分钟甚至数小时才能将高浓度的糖化白蛋白酶解完全,而应用于全自动生化分析仪的FAOD检测法通常要求GA的酶解效率在180-600秒内达到90%以上。为了达到此技术要求,现有的技术常采用加大蛋白酶浓度或加入高浓度的蛋白变性剂加快酶解反应的速度。采用加大蛋白酶浓度的酶解方法不仅增加了检测成本,而且使测定试剂的粘度增加从而对测定造成不利影响;加入高浓度蛋白变性剂的方法虽然加快了糖化白蛋白的酶解速度,但使蛋白酶的存储稳定性降低,对试剂的有效期产生不利影响。
本发明的建立了一种快速酶解糖化白蛋白的方法,该方法通过在含有低浓度蛋白酶和蛋白变性剂的酶解液中添加一定浓度的离子液体用于提高蛋白酶的活性和稳定性,实现在180-600秒内将糖化白蛋白快速酶解,特别适合FAOD法测定糖化白蛋白的方法学及测定试剂开发。
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