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一种疏螺旋体单菌落分离纯化的方法及其应用(专利号:ZL 201310390968.5)
技术背景:
疏螺旋体的单菌落分离及纯培养却不能按照常规的方法进行,首先是因为该菌株生长速度缓慢。从一个细胞生成一个单菌落直至获得纯培养物,往往需要两周以上的时间,如果按常规的涂布平板法和平板划线法进行单菌落分离,如何在培养周期内保持平板的湿度是一个挑战。伯氏疏螺旋体在自然生活周期中是专性寄生的,代谢能力有限,只能在复杂的、关键营养成分不确定的BSK(Stoenner-Kelly Medium)培养基中生长。那些不确定的关键的BSK培养基成分,如兔血清、牛血清蛋白的粗提物等限制了对伯氏疏螺旋体营养缺陷型的鉴定,这就使得富集培养法分离单菌落获得纯培养几乎不可能。更为重要的是,疏螺旋体是一种不好氧的细菌,常规的涂布平板法和平板划线法进行单菌落分离时,平板表面完全暴露,不利于疏螺旋体的生长。这些都使得常规的微生物学单菌落分离方法很难应用的疏螺旋体的研究、诊断中。
目前疏螺旋体的单菌落分离采用的是有限稀释法,即将想要分离的螺旋体混合培养物用培养基稀释,然后分别放入96孔板中,培养一周后,如果有小于12个孔有疏螺旋体细胞,则可认为每个孔中的培养物由一个单细胞复制产生,由此获得纯培养并实现疏螺旋体的分离和纯化。
 
成果概要:
1本发明的目的是在于提供了一种疏螺旋体的单菌落分离及纯化的方法,该方法操作简单快速,结果明晰。2本发明的另外一个目的在于提供一种疏螺旋体的固体培养基的制备方法,适用于疏螺旋体细菌的培养和分离、纯化和鉴定。
 
应用领域:
本发明所涉及的微生物菌株包括但不仅限于伯氏疏螺旋体,所有可以用常规BSK培养基培养的疏螺旋体属细菌均可应用于本发明,包括回归热疏螺旋体(Borrelia recurrentis),杜通疏螺旋体(Borrelia duttonii)、赫姆斯疏螺旋体(Borrelia hermsii)、波斯疏螺旋体(Borrelia persica)和拉氏疏螺旋体(Borrelia latyschewii)。
 
发明人及联系人:
楼永良 教授
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